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Expressao do Gene L1 de HPV-16 em Pichia pastoris
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A infecçăo persistente por tipos oncogęnicos de Papilomavírus Humano (HPV) é necessária para o desenvolvimento do câncer cervical e colabora no estabelecimento de outros tumores anogenitais e orofaríngeos. A utilizaçăo de Virus-like Particles (VLPs) produzidas a partir da superexpressăo da proteína L1 do capsídeo viral em sistemas recombinantes é a base das atuais vacinas anti-HPV. Apesar de eficazes, o elevado custo de produçăo e o baixo espectro de açăo de tais vacinas comprometem seu estabelecimento. Neste trabalho avaliamos a produçăo extracelular da proteína L1 de HPV-16 a partir de células de Pichia pastoris e mediante a utilizaçăo dos sistemas baseados no promotor induzível AOX1 e no promotor constitutivo PGK1. A secreçăo da proteína L1 no meio de cultura foi confirmada através do emprego de anticorpo monoclonal anti-L1 em ensaios de colony, dot e western blotting. Embora otimizaçőes sejam necessárias para aumentar o rendimento de produçăo, o sistema năo comercial baseado no promotor constitutivo PGK1 representa uma atrativa plataforma para produçăo da proteína L1 com fins vacinais.
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